grafene

Impatto ecotossicologico dell’ossido di grafene: effetti tossici sull’organismo modello Artemia francescana

Federica Cavion , aLaura Fusco , b Silvio Sosa , a Chiara Manfrin , a Beatriz Alonso , c Amaia Zurutuza , c Roberto Della Loggia , b Aurelia Tubaro , a Maurizio Prato bde  and  Marco Pelin * 

Astratto

Date le numerose potenziali applicazioni dell’ossido di grafene (GO) e il suo conseguente rilascio nell’ambiente, questo studio è stato condotto per valutare gli effetti tossici del GO su Artemia franciscana , un organismo modello ben consolidato per studi ecotossicologici marini. I naupli o gli adulti di A. franciscana stadio I sono stati esposti a GO (1-100 μg mL -1 ) fino a 72 ore, il che ha indotto una mortalità significativa solo negli adulti esposti alla concentrazione più alta per 72 ore. La suscettibilità degli adulti alla OB è stata ulteriormente studiata valutando altri biomarcatori di tossicità: già 24 h di esposizione a 100 μg mL -1 GO inducevano una significativa attivazione dell’enzima xenobiotico detossificante e antiossidante glutatione S.-transferasi, mentre altri parametri tossicologici, come la produzione di specie reattive dell’ossigeno (ROS), l’attività della colinesterasi e il tasso di crescita, non sono stati influenzati anche dopo 72 ore di esposizione. Inoltre, è stata studiata la captazione della GO in relazione all’integratore alimentare: l’accumulo di GO nel tratto digerente era inferiore in presenza di cibo, rispetto agli organismi non nutriti. In conclusione, questo studio evidenzia i deboli effetti tossici della GO sugli adulti di A. franciscana , inferiori a quelli indotti da altri materiali a base di carbonio. Tuttavia, questo suggerisce un possibile impatto ecotossicologico della OB che deve essere ulteriormente studiato.

Abstract grafico: Impatto ecotossicologico dell'ossido di grafene: effetti tossici sull'organismo modello Artemia francescana

Importanza ambientale

L’ampia varietà di applicazioni tecnologiche dei materiali a base di grafene (GBM) e il loro conseguente ingresso nel mercato pongono serie preoccupazioni sulla loro sicurezza ambientale. Tuttavia, il loro potenziale impatto ambientale, in particolare sull’ecosistema acquatico, è ancora poco studiato. Per studiare l’effetto ecotossicologico dell’ossido di grafene (GO), come rappresentativo dei GBM, questo studio è stato condotto sull’organismo modello Artemia franciscana per studi ecotossicologici. GO ha mostrato una debole tossicità sugli adulti di A. franciscana , ma non sulle larve, portando alla morte dell’organismo, non associata a stress ossidativo, solo dopo una lunga esposizione ad alte concentrazioni. Questi risultati non possono escludere che GO possa compromettere l’ Artemiapopolazione, con possibili effetti sulla biodiversità dell’ecosistema, Artemia spp. far parte della catena alimentare acquatica.

1. Introduzione

I materiali a base di grafene (GBM) sono una classe di materiali a base di carbonio caratterizzati dalle loro straordinarie caratteristiche meccaniche, ottiche, elettriche e termiche. Le loro proprietà fisico-chimiche li qualificano come nanostrumenti attraenti, trovando potenziali applicazioni in biomedicina e nanoelettronica come nuovi componenti per la terapia fototermica/fotodinamica, l’ingegneria dei tessuti e la somministrazione di geni/farmaci, 1 così come celle chimiche solari e a combustibile, supercondensatori, sensori ultrasensibili e carica/scarica rapida delle batterie, solo per citarne alcune. 2 Tra i GBM, l’ossido di grafene (GO) è stato ampiamente esplorato in diversi campi, in particolare per le strategie terapeutiche cliniche, 1grazie alla facile funzionalizzazione e disperdibilità in soluzioni acquose. L’ampia varietà di possibili applicazioni di GO, lo sviluppo di prodotti commerciali e la relativa generazione di rifiuti pongono il problema dell’immissione di materiale nell’ambiente. Pertanto, è importante studiare l’impatto ecotossicologico del GO. In particolare, le proprietà fisico-chimiche del GO, come l’ampia area superficiale e la presenza di gruppi funzionali reattivi dell’ossigeno ( ad es. , gruppi epossido, idrossile, estere, carbossilico e carbonilico), conferiscono al materiale un’idrofilia superiore rispetto ad altri GBM, 3-7favorendone la dispersione negli ambienti acquatici nonché le interazioni con gli organismi acquatici. Tuttavia, il potenziale impatto della GO sull’ecosistema acquatico, in particolare su quello marino, è stato finora poco chiarito. Di conseguenza, la tossicità del GO sugli organismi acquatici e il rischio associato alla loro esposizione al materiale nelle sorgenti acquatiche meritano di essere studiati a fondo.

È già stato segnalato che questo materiale potrebbe indurre un impatto negativo sugli organismi marini. Ad esempio, è stato dimostrato che GO è stato in grado di ridurre la crescita e la concentrazione di pigmenti fotosintetici nelle alghe del genere Picochlorum . 8 Nel polichete Diopatra neapolitana , il danno cellulare indotto da GO, ha effetti negativi sulla capacità rigenerativa e sulle risposte energetiche alterate. 9 Inoltre, i test in vitro sugli emociti di cozze ( Mytilus galloprovincialis ) hanno mostrato che il GO induce effetti citotossici significativi, con un aumento della produzione di specie reattive dell’ossigeno (ROS) e danni alla membrana. 10Inoltre, studi condotti su crostacei, come le larve di Amphibalanus amphitrite 11 e i naupli di Artemia salina , 12-14 , hanno dimostrato la capacità del GO di aumentare la mortalità e la produzione di ROS.

Artemia , genere di crostacei anostracani adattati all’ambiente ipersalino e presente in laghi salati, lagune costiere e saline artificiali, 15 comprende specie comunemente utilizzate negli studi tossicologici ed ecotossicologici, in particolare quelli relativi alla valutazione degli impatti negativi a il livello marino. 16 Le diverse caratteristiche di Artemia spp. renderli organismi modello in questo campo di ricerca. Ad esempio, le specie di Artemia sono adatte alla coltura e al mantenimento in laboratorio, hanno un ciclo di vita breve e un’ampia distribuzione geografica e vi è una buona conoscenza della loro biologia ed ecologia. 15Queste specie sono caratterizzate da più di 15 mute durante il loro ciclo vitale, con quattro stadi di sviluppo principalmente distinguibili (nauplius, metanauplius, giovanile e adulto), e si nutrono di batteri, microalghe e protozoi. 17 I principali predatori di Artemia sono uccelli e corixidi 18 ma questo crostaceo è una fonte di cibo adatta per diversi organismi, come foraminiferi, celenterati, vermi piatti, policheti, cnidari, calamari, insetti, chetognati, pesci e altri crostacei. 19 Artemia franciscana è la specie più abbondante di Artemia , largamente utilizzata anche per scopi di acquacoltura.

Nell’ultimo decennio, Artemia spp. hanno iniziato ad attirare l’attenzione come modello biologico adatto per i test di nanoecotossicità 20 e sono state recentemente introdotte linee guida specifiche dell’Organizzazione internazionale per la standardizzazione (ISO) per valutare la tossicità acquatica acuta dei nanomateriali mediante una procedura di test standardizzata utilizzando Artemia spp. naupli. 21 Dal 2009 sono stati pubblicati più di 50 studi su Artemia spp. utilizzato come modello di organismo per la valutazione dell’impatto ecotossicologico dei nanomateriali a livello acquatico, inclusi argento, biossido di titanio e vari materiali a base di carbonio, come fullerene, nerofumo, nanopunti di carbonio e grafene. 21Ad esempio, Pretti et al. non hanno trovato mortalità in A. salina nauplii esposti a scaglie di monostrato di grafene incontaminate (fino a 10 μg mL -1 ) per 24 h; tuttavia, dopo 48 ore di esposizione, concentrazioni più basse hanno indotto stress ossidativo, rilevato da un’aumentata attività della catalasi e della glutatione perossidasi. 22 Inoltre, la riduzione dei punti quantici di ossido di grafene ha indotto la mortalità dose- e tempo-dipendente di A. salina nauplii, con un effetto massimo (circa il 50% di mortalità) dopo 48 ore di esposizione alla concentrazione più alta (160 μg mL -1 ). 23

Considerando il possibile futuro rilascio di GO nell’ambiente acquatico durante il suo ciclo di vita industriale, qui abbiamo studiato gli effetti di GO su A. franciscana . L’effetto GO è stato valutato sia sui naupli che sugli adulti, determinando la mortalità dopo 24, 48 e 72 ore di esposizione, così come altri biomarcatori di tossicità, tra cui la produzione di ROS, il tasso di crescita e l’attività di enzimi selezionati (glutatione S- transferasi, come un enzima xenobiotico disintossicante e antiossidante, e la colinesterasi, come marker di neurotossicità). Inoltre, sono stati studiati l’assorbimento e l’accumulo di GO in A. franciscana .

2. Metodi

2.1 Prodotti chimici

GO (batch #GOB067) è stato fornito da Graphenea (San Sebastian, Spagna). La caratterizzazione completa del materiale è stata precedentemente riportata: 24 brevemente, l’analisi elementare ha mostrato valori medi di 59,40 ± 0,10% C, 1,40 ± 0,10% H, 0,07 ± 0,02% N e <36,6% O. La dimensione laterale media, valutata da la diffrazione laser nello slurry GO, era di 15 100 ± 400 nm con una distribuzione dimensionale laterale situata tra 6000 e 30 000 nm. L’analisi di diffrazione dei raggi X (XRD) eseguita su un film secco GO ha rivelato sei strati. Spettri Raman rappresentativi, microscopia a trasmissione elettronica ad alta risoluzione (HR-TEM) e immagini di microscopia elettronica a scansione (SEM) sono riportati nell’ESI †(Fig. S1). Per la caratterizzazione fisico-chimica completa del GO, fare riferimento al nostro precedente studio eseguito con lo stesso lotto di GO. 24 La sintesi di GO è stata effettuata in ambiente acido (H 2 SO 4 ) e la dispersione finale del materiale è stata in acqua. La purificazione è stata effettuata mediante ripetuti lavaggi in acqua distillata, ma l’analisi elementare ha rivelato che una piccola percentuale di S (circa il 2%) rimaneva nel materiale finale, principalmente come SO 4 2− .

2.2 Organismo modello

Cisti disidratate di A. franciscana e prodotti per la schiusa e l’allevamento di questo crostaceo sono stati acquistati da Hobby (Gelsdorf, Germania). Per ottenere larve allo stadio I, circa 300 mg di cisti sono state schiuse in una capsula specifica per l’ incubazione di Artemia in 750 ml di acqua di mare artificiale (per ogni litro di H 2 O deionizzata , 36 g di sale basico di Optimum Sea; Wave) in presenza costante di acqua di mare artificiale luce a 25 °C per 24 h. I sali basici Optimum Sea sono specifici per gli organismi marini e, come dichiarato dal fornitore, sono composti da oltre 70 elementi con le seguenti caratteristiche principali: Ca 2+ = 440 mg L −1 , Mg 2+ = 1300 mg L −1e assenza di nitrati e fosfati. Successivamente, le larve sono state separate dalle cisti non schiuse, trasferite in acqua di mare artificiale fresca e (i) utilizzate per il test di mortalità o (ii) trasferite in un becher e allevate in acqua di mare artificiale per 21 giorni per ottenere adulti di A. franciscana . Durante i primi 10 giorni dalla schiusa, le Artemia sono state alimentate tre volte alla settimana con alimenti liquidi (Liquizell, Hobby; Germania) e, successivamente, solidi (Mikrozell, Hobby; Germania), specifici per la coltura di Artemia . Gli organismi sono stati mantenuti a 25°C con un ciclo luce/buio di 16:8 ore.

2.3 Identificazione genetica di Artemia francescana

L’identificazione della specie Artemia franciscana è stata effettuata utilizzando gDNA estratto da 5 organismi con il kit GenElute™ Blood Genomic DNA (Sigma-Aldrich, Milano, Italia). Un frammento del gene della subunità I della citocromo c ossidasi (COI) è stato amplificato utilizzando primer LCO1490: 5′-ggtcaacaaatcataaagatattgg-3′ e HC02198: 5′-taaacttcagggtgaccaaaaaatca-3′. 25La PCR, eseguita in un volume finale di 50 μL, è stata eseguita con 1× PerfeCTa SYBR Green SuperMix (Quantabio Beverly, MA, USA), 0,3 μM di ciascun primer e 18 ng di gDNA, seguendo il profilo termico di contatto come segue: denaturazione iniziale 95 °C per 60 s; 35 cicli con denaturazione a 95 °C per 10 s, annealing a 56 °C per 30 s e allungamento a 72 °C per 20 s più un’estensione finale a 72 °C per 60 s. La PCR è stata controllata utilizzando gel elettroforetico TAE 1,5% e la banda prevista di 710 bp è stata asportata e purificata con il kit di estrazione EZNA® Gel (Omega Bio-tek; Norcross, USA). Le PCR purificate sono state inviate a un servizio esterno per essere sequenziate da Sanger (Eurofins; Amburgo, Germania).

2.4 Test di mortalità

Il test di mortalità è stato eseguito in triplicato su naupli prelevati dopo 24 h dalla schiusa che corrispondono approssimativamente al primo stadio (stadio I), e su organismi adulti (21 giorni). Per ogni trattamento, 5 naupli instar sono stati trasferiti in ciascun pozzetto di una piastra di polistirene da 96 pozzetti contenente 200 µl di GO sospesi in acqua di mare (1, 10 e 100 µg mL −1 ) e incubati per 24, 48 e 72 h a 25° C in un ciclo luce/buio di 16: 8 h, mentre per gli adulti, 50 organismi sono stati trasferiti in ciascun pozzetto di una piastra a 6 pozzetti contenente 4,5 mL di sospensione GO nelle stesse condizioni. I naupli non sono stati nutriti durante l’esposizione a GO, mentre Artemiagli adulti hanno ricevuto mangime solido 24 ore prima e 24 ore dopo l’esposizione a GO. Dopo l’esposizione a GO, le piastre sono state esaminate sotto uno stereomicroscopio binoculare (Kyowa, Tokyo, Giappone) con ingrandimento 3× per i naupli e ingrandimento 1× per gli adulti. Il numero di gamberetti morti è stato valutato definendo la mortalità in assenza di qualsiasi movimento durante 10 secondi di osservazione secondo Zulkifli et al. 26 I dati sono riportati come % di organismi morti rispetto al numero totale di organismi esposti alla stessa concentrazione di GO.

2.5 Rilevamento ROS

La produzione di ROS negli adulti di A. franciscana è stata valutata dopo 24 e 72 ore di esposizione a GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) utilizzando il test 2′,7′-diclorofluorescina diacetato (DCFDA) (Sigma-Aldrich; Milano, Italia ) in grado di misurare in modo fluorimetrico i radicali idrossile/perossinitrito secondo Zhu et al. 13 In breve, per ogni determinazione, 5 organismi sono stati lavati 3 volte in TRIS-HCl (100 mM, pH 7,5) e omogeneizzati in 1 mL dello stesso tampone per 15 secondi utilizzando un sonicatore ad immersione (processore ad ultrasuoni UP50H; Hielscher, Teltow, Germania ). I campioni sono stati centrifugati a 12000 gper 15 min a 4°C e il surnatante è stato raccolto e conservato a -80°C. Per misurare la produzione di ROS, in ciascun pozzetto di una piastra da 96 pozzetti, sono stati aggiunti 20 µl di surnatante e miscelati con 160 µl di tampone fosfato salino (PBS) e 20 µl di DCFDA (concentrazione finale 40 µM). La piastra è stata incubata per 30 minuti a 37 ° C al buio e la fluorescenza è stata letta utilizzando un lettore di micropiastre (Fluorocount, Packard; Germania) a 485 nm e 520 nm (la lunghezza d’onda di eccitazione ed emissione, rispettivamente). Il contenuto proteico è stato misurato utilizzando un NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Milano, Italia) e, per ogni campione, i risultati finali sono stati riportati come unità di fluorescenza relativa (RFU) normalizzate su mg di proteine.

2.6 Estrazione enzimatica

Gli enzimi (glutatione S- transferasi e colinesterasi) sono stati estratti da adulti di Artemia secondo Jemec et al. 27 In breve, 50 adulti sono stati esposti a GO (1, 10 o 100 μg mL -1 ) per 24 e 72 ore. Successivamente, gli organismi viventi sono stati raccolti, lavati tre volte con tampone fosfato (50 mM, pH 7 composto da Na 2 HPO 4 e NaH 2 PO 4 ) contenente EDTA (5 mM), sonicati in 240 μL di tampone fosfato (50 mM, pH 7) e centrifugato a 15000 g per 25 min a 4 °C. I surnatanti sono stati raccolti e conservati a -80 °C dopo la quantificazione delle proteine ​​utilizzando il NanoDrop.

2.6.1 Attività del glutatione S-transferasi

Per valutare l’attività della glutatione S- transferasi (GST), sono stati aggiunti 25 μL di surnatante in ciascun pozzetto di una piastra da 96 pozzetti, seguiti da 25 μL di l- glutatione ridotto 4 mM (Sigma-Aldrich; Milano, Italia), 2 μL di 50 mM 1-cloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB; Sigma-Aldrich; Milano, Italia) e 48 μL di tampone fosfato di potassio (100 mM, pH 6.5, composto da K 2 HPO 4 e KH 2 PO 4 ). Il bianco è stato preparato allo stesso modo, ma la sonda (CDNB) è stata sostituita con 2 μL di tampone fosfato di potassio. L’assorbanza è stata letta utilizzando un lettore di micropiastre (PowerWaveX, Bio-Tek Instruments Inc.; Vermont, USA) a 340 nm ogni 30 s per 4 min.

2.6.2 Attività della colinesterasi

Per valutare l’attività della colinesterasi (ChE), in ciascun pozzetto di una piastra da 96 pozzetti, 50 μL di surnatante sono stati miscelati con 10 μL di acetiltiocolina ioduro 10 mM (Sigma-Aldrich; Milano, Italia), 10 μL di 5 mM 5 ,5′-ditiobis(acido 2-nitrobenzoico) (DTNB) (Sigma-Aldrich; Milano, Italia) e 30 μL di tampone fosfato di potassio (100 mM, ph 7.4). Nel caso del bianco, DTNB è stato sostituito con tampone fosfato di potassio. L’assorbanza è stata misurata a 405 nm ogni minuto per 3 minuti con un lettore di micropiastre (TECAN; Männedorf, Svizzera).

2.6.3 Quantificazione dell’attività enzimatica

L’attività enzimatica è stata espressa in unità enzimatiche (EU), calcolate come segue:dove ε era 9600 M -1 cm -1 e 13 600 M -1 cm -1 rispettivamente per GST e ChE.

L’attività enzimatica è stata riportata come UE per numero di organismi nel campione.

2.7 Contenuto proteico

Il contenuto proteico è stato analizzato per studiare l’effetto GO sulla crescita di A. franciscana . In breve, dopo l’esposizione a GO, gli organismi sono stati raccolti e processati come riportato per l’estrazione enzimatica. Il contenuto proteico nei surnatanti è stato misurato utilizzando uno strumento NanoDrop (NanoDrop 2000; Thermo Scientific; Milano, Italia) a una lunghezza d’onda di 280 nm. I risultati sono stati riportati come mg di proteine ​​normalizzate sul numero di organismi in ciascun campione.

2.8 Assorbimento di GO

Per valutare l’assorbimento di GO da parte di A. franciscana , 10 organismi, alimentati 24 ore prima del trattamento, sono stati esposti a GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) in presenza o assenza di cibo (aggiunto 24 ore dopo l’esposizione a GO ). Dopo 24, 48 e 72 ore di esposizione, gli organismi sono stati fissati con p- formaldeide al 4% (Sigma-Aldrich; Milano, Italia) per 20 minuti a temperatura ambiente. Dopo tre lavaggi con acqua distillata, gli organismi sono stati osservati allo stereomicroscopio binoculare (Kyowa; Tokyo, Giappone) ed è stata valutata otticamente la presenza di GO e/o mangime nel lume del tratto intestinale (colore nero e verde, rispettivamente).

2.9 Analisi statistica

Le analisi statistiche sono state fornite utilizzando il software GraphPad Prism versione 6.00. Le medie e gli errori standard delle medie (SE) di esperimenti indipendenti sono stati calcolati e analizzati con il test t di Student . Per ogni analisi è stata considerata la significatività statistica per valori di p <0,05.

3. Risultati

3.1 Identificazione genetica di Artemia francescana

Poiché sono state mostrate variazioni di sensibilità interspecie verso varie tossine e fattori di stress ambientale tra le specie di Artemia (ad esempio A. franciscana e A. salina ), 28 per evitare imprecisioni tassonomiche, è stata inizialmente effettuata l’identificazione genetica dell’organismo impiegato in questo studio. Infatti, nonostante appartengano allo stesso genere, la corretta identificazione delle specie è di primaria importanza per delineare risposte specifiche al GO che possono variare da specie a specie. Il sequenziamento PCR della regione del gene COI ha confermato l’identità di Artemia franciscana mediante confronto BLASTn con A. franciscanaisolati (ID GenBank: DQ119645 e MK393317), che hanno portato a un’identità di sequenza del 99%. La sequenza condivisa con quella di Artemia salina variava tra l’84,8 e l’84,2%, consentendo l’esclusione della specie A. salina .

3.2 Effetto della GO sulla vitalità di A. franciscana

Per valutare la tossicità della GO verso A. fanciscana , naupli o adulti sono stati esposti a diverse concentrazioni di GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) per 24, 48 e 72 h, o non trattati (0 μg mL -1 ; controlli), e la mortalità è stata valutata allo stereomicroscopio ( Fig. 1 ). Sebbene non sia stata osservata alcuna tossicità GO significativa nei confronti dei naupli a nessuna concentrazione e tempo di esposizione ( Fig. 1a ), è stato osservato un aumento significativo della mortalità (25%) per gli adulti di A. franciscana dopo 72 ore di esposizione alla più alta concentrazione di GO (100 μg mL -1 ), rispetto ai controlli ( p < 0,05) ( Fig. 1b ). La mortalità diI controlli di A. franciscana negli adulti erano bassi (<5%) in ciascuna condizione sperimentale, indicando il benessere degli organismi durante tutte le analisi.

Fig. 1 Mortalità di A. franciscana nauplii (a) e adulti (b) esposti a GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) per 24, 48 e 72 h. I dati sono presentati come % di organismi morti rispetto al numero totale di organismi nel campione e sono le medie ± SE di almeno tre esperimenti. Differenze statistiche: * p <0,05, test t di Student rispetto ai controlli (0 μg mL -1 ).

3.3 Effetto della GO su A. franciscana come produzione di ROS e attività del glutatione S- transferasi

Per chiarire il meccanismo alla base della mortalità indotta da GO osservata negli adulti di A. franciscana , è stata valutata la capacità di GO di indurre stress ossidativo mediante un’aumentata produzione di ROS, utilizzando il test DCFDA. Inoltre , è stata valutata l’attività della glutatione S- transferasi (GST), uno dei principali enzimi xenobiotici disintossicanti e antiossidanti. Rispetto ai controlli non trattati, l’esposizione di adulti di A. franciscana a GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) per 24 e 72 ore non ha indotto alcun aumento significativo della produzione di ROS ( Fig. 2a ). Tuttavia, l’esposizione degli adulti di A. fanciscana alla più alta concentrazione di GO (100 μg mL -1) ha indotto un significativo aumento tempo-dipendente dell’attività GST rispetto ai controlli non trattati (aumenti del 156% e del 264% dopo 24 e 72 h, rispettivamente; p < 0,05) ( Fig. 2b ).

Fig. 2 Stress ossidativo indotto da GO negli adulti di A. franciscana . Produzione di ROS (a) e attività GST (b) in adulti di A. franciscana esposti a GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) per 24 e 72 h. I dati sono presentati come unità fluorescenti relative (RFU) normalizzate su mg di proteine ​​(a) e unità enzimatiche (EU) normalizzate sul numero totale di organismi (b), e sono le medie ± SE di almeno tre esperimenti. Differenze statistiche: * p < 0,05, test t di Student .

3.4 Effetti della GO sulla motilità di A. franciscana e sull’attività della colinesterasi

Durante il test di mortalità, la ridotta motilità degli adulti di A. franciscana è stata associata all’esposizione a GO, in particolare alla concentrazione più alta (100 μg mL -1 ). Questo risultato potrebbe essere correlato a un danno fisico dovuto alla presenza di aggregati di GO e/o agglomerati sopra le appendici natatorie, come osservato dopo 72 ore di esposizione al materiale ( Fig. 3a ). Tuttavia, potrebbe essere correlato anche alla compromissione dei movimenti mediata biochimicamente. Pertanto, è stata valutata l’attività della colinesterasi (ChE), un enzima chiave coinvolto nella regolazione della ricezione dell’acetilcolina nei siti neuromuscolari. Rispetto ai controlli non trattati, non sono stati osservati effetti significativi sull’attività ChE dopo 24 o 72 ore di esposizione a GO (1, 10 e 100 μg mL−1 ) ( Fig. 3b ).

Fig. 3 Immagine rappresentativa di A. fanciscana adulto esposto a 100 μg mL -1 GO per 72 h sotto uno stereomicroscopio (a); le frecce indicano la presenza di aggregati/agglomerati GO. Attività della colinesterasi (b) negli adulti di A. franciscana esposti a GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) per 24 e 72 h. I dati dell’attività della colinesterasi sono presentati come unità enzimatiche (EU) normalizzate sul numero totale di organismi e sono le medie ± SE di tre esperimenti.

3.5 Effetti della GO sulla crescita adulta di A. franciscana

Per valutare gli effetti della GO sul tasso di crescita degli adulti di A. franciscana , gli organismi sono stati esposti al materiale (1, 10 e 100 μg mL -1 ) per 24 e 72 ore. Successivamente, è stata valutata la velocità di crescita misurando il contenuto proteico nel surnatante raccolto dopo centrifugazione degli organismi omogeneizzati ( Fig. 4 ). Rispetto ai controlli non trattati, l’esposizione a GO non ha indotto alcuna differenza significativa nel contenuto proteico in nessun momento dell’esposizione, suggerendo alcun effetto sul tasso di crescita dei gamberetti. Inoltre, il contenuto proteico registrato dopo 72 h di esposizione a GO era significativamente superiore a quello registrato dopo 24 h sia nei controlli non trattati che negli organismi trattati con GO, confermando un tasso di crescita fisiologico di A. franciscana adulti nell’arco di tempo.

Fig. 4 Contenuto proteico negli adulti di A. franciscana esposti a GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) per 24 e 72 h come indice del tasso di crescita. I dati sono presentati come mg di proteine ​​normalizzati sul numero totale di organismi e sono le medie ± SE di cinque esperimenti. Differenze statistiche 24 vs 72 h: * p < 0,05, ** p < 0,01, t- test di Student .

3.6 Assunzione di GO da parte degli adulti di A. franciscana

Il bioaccumulo di GO negli adulti di A. franciscana dopo 24, 48 e 72 h di esposizione a 1, 10 e 100 μg mL -1 del materiale è stato valutato utilizzando uno stereomicroscopio, sia in presenza che in assenza di cibo (è stato aggiunto 24 h dopo l’esposizione a GO). Come mostrato in Fig. 5 , adulti esposti alla più alta concentrazione di GO (100 μg mL -1) accumulato aggregati/agglomerati di GO nero nel lume dell’intestino (frecce nere). L’accumulo di GO nell’intestino sembra essere maggiore negli organismi privi di cibo rispetto agli organismi con libero accesso al cibo. Quest’ultimo ha mostrato la presenza di particelle alimentari verdi (frecce verdi) e solo un leggero accumulo di GO nella parte terminale del tratto intestinale (frecce nere). Come previsto, i controlli non trattati presentavano un intestino vuoto in assenza di cibo o particelle verdi nel lume dopo l’aggiunta di cibo (frecce verdi). Risultati simili sono stati registrati anche dopo 48 ore di esposizione a tutte le concentrazioni di GO. L’assorbimento di GO da parte degli adulti di A. franciscana dopo 24 e 48 ore di esposizione è visibile nell’ESI † (Fig. S2).

Fig. 5 Assorbimento di GO da parte degli adulti di A. franciscana . Immagini rappresentative di adulti A. franciscana esposti a GO per 72 h, in assenza e in presenza di cibo, nonché di controlli A. franciscana non trattati (0 μg mL -1 ). Le frecce nere e verdi indicano rispettivamente GO e cibo nel lume del tubo digerente. Le immagini sono state acquisite allo stereomicroscopio con ingrandimento 1×. Barre della scala: 1 mm.

4. Discussione

GO è un GBM che ha un ampio spettro di possibili applicazioni grazie alle sue peculiari proprietà fisico-chimiche. Tuttavia, alcune evidenze di effetti negativi in ​​diversi organismi invertebrati e vertebrati 29 suggeriscono un possibile impatto ecotossicologico dei GBM. Nell’ambiente acquatico è stato osservato un impatto negativo per le microalghe, 30,31 i crostacei Daphnia magna , 32 Ceriodaphnia dubia 33 e Amphibalanus anfitrite , 11 policheti, 9 e protozoi, 34 nonché embrioni di zebrafish 35,36 e adulti. 37In generale, i nanomateriali a base di carbonio, inclusi i GBM, sono leggermente tossici per la maggior parte degli organismi acquatici e il loro effetto semimassimo (EC 50 ) varia tra 10 e 100 μg mL -1 . Tuttavia, i loro effetti tossici dipendono (i) dal tipo di materiale, poiché le proprietà fisico-chimiche ei metodi di produzione possono modulare la tossicità ( ad es . dimensione, funzionalizzazione e solvente utilizzato per la preparazione); (ii) la sensibilità di ciascuna specie (le più sensibili sembravano essere le alghe, seguite da crostacei, pesci e batteri) e (iii) il tempo di esposizione. 38Inoltre va considerato che il GO si agglomera facilmente in acqua salina e che un aumento della salinità oltre il 10‰ diminuisce la velocità di sedimentazione per la formazione di agglomerati ramificati. Pertanto, nelle acque saline, il GO potrebbe subire alcune trasformazioni che influiscono sui suoi potenziali effetti sugli organismi acquatici. 39

Nel presente lavoro, l’ A. franciscana è stata utilizzata come organismo modello per studiare il possibile effetto ecotossicologico del GO, in prospettiva del suo crescente rilascio futuro nell’ambiente. A. franciscana è stata esposta a GO a concentrazioni (1, 10 e 100 μg mL -1 ) selezionate sulla base dei dati di letteratura sulla tossicità dei nanomateriali a base di carbonio per gli organismi acquatici. 38

Inizialmente, per valutare lo stadio di sviluppo più sensibile alla GO, è stata studiata la mortalità esponendo naupli (instar I) o adulti di A. franciscana a GO (1, 10 e 100 μg mL -1 ) per 24, 48 e 72 h. La GO ha indotto un debole ma significativo aumento della mortalità (25%) solo negli adulti di A. franciscana esposti alla massima concentrazione di materiale per 72 h, dimostrando che la sensibilità di questa specie alla GO è influenzata dallo stadio di sviluppo. In letteratura è riportata una mortalità bassa ma significativa (circa il 10%) per nauplii di A. franciscana stadio I esposti per 24 h al nerofumo, a partire da una concentrazione di 100 μg mL -1 . 16Un tasso di mortalità simile è stato osservato nelle stesse condizioni di A. salina stadio I naupli esposti a nanotubi di carbonio a parete multipla ossidati, con una concentrazione letale per il 50% degli organismi esposti (LC 50 ) maggiore di 600 mg mL -1 . 40 Tuttavia, il nostro studio non ha mostrato mortalità significativa di naupli di stadio I di A. franciscana esposti fino a 100 μg mL -1GO per 72 h, suggerendo una tossicità inferiore di GO rispetto a quella di altri materiali a base di carbonio, come il nerofumo o i nanotubi di carbonio a parete multipla ossidati. Inoltre, non si può escludere che la bassa mortalità dei naupli esposti al GO possa essere dovuta, almeno in parte, alle condizioni di digiuno in cui sono stati esposti al GBM. D’altra parte, non si può escludere che questa condizione possa implicare una mortalità sopravvalutata, poiché il digiuno potrebbe aumentare la sensibilità dell’organismo agli stimoli stressanti. Pertanto, è ragionevole ipotizzare che i naupli siano meno sensibili agli effetti tossici del GO rispetto agli adulti.

Per quanto a nostra conoscenza, non sono riportati dati di letteratura che confrontino gli effetti della GO verso lo stadio larvale e quello adulto dell’Artemia . La nostra scoperta è in accordo con studi precedenti che dimostrano che i naupli di Artemia allo stadio I sono più resistenti ad alcuni xenobiotici, come reagenti o elementi chimici inorganici (rame), rispetto agli stadi più sviluppati. 41,42 Questo riscontro è stato registrato anche per A. salina esposta al fullerene (C 60 ): i naupli di stadio I erano più resistenti a questo materiale carbonioso, mentre gli adulti erano più sensibili degli organismi a stadi di sviluppo inferiori, come i naupli di stadio 2, metanauplii (fino a 96 h dopo la schiusa) e zoea (fino a 7 giorni). 43In particolare, in linea con la nostra osservazione, i pochi dati di letteratura sulla tossicità del GO verso A. salina , limitati allo stadio larvale, mostrano un aumento della mortalità dei naupli di Artemia instar I solo a concentrazioni di GO superiori a 100 μg mL -1 . 12-14 La resistenza delle larve rispetto agli adulti è probabilmente dovuta a differenze morfologiche e funzionali e stati metabolici. Ad esempio, le larve instar I mancano di formazioni anatomiche critiche ( es . bocca e ano), che iniziano a svilupparsi allo stadio II, limitando la possibilità di ingestione e il conseguente bioaccumulo di GO.

La mortalità di Artemia spp. esposti ai nanomateriali a base di carbonio dipende non solo dal loro stadio di sviluppo, ma anche dal tipo di nanomateriale, dalle modalità della sua produzione e dalla sua funzionalizzazione. Infatti, la potenza letale del nerofumo verso i naupli di stadio II di A. franciscana dopo 24 ore di esposizione (LC 50 = 370 μg mL -1 ) era superiore a quella del nerofumo funzionalizzato mediante l’introduzione di gruppi aril-carbossilato dal para- ammino benzoico acido (LC 50 = 1000 μg mL -1 ). 16 Per quanto riguarda i metodi di produzione, Kim et al. differenze osservate nella mortalità di A. franciscananaupli di stadio I esposti per 24 e 48 ore a nanopunti di carbonio prodotti con lo stesso metodo sintetico e precursori, ma utilizzando solventi diversi. 44

Considerando che, nel nostro studio, la GO ha indotto una mortalità lieve, ma significativa, solo negli adulti di A. franciscana , solo gli organismi in questa fase di sviluppo sono stati studiati per la loro suscettibilità alla GO, valutando altri biomarcatori e parametri di tossicità. Uno dei principali meccanismi di tossicità da GBM sembra essere un aumento della produzione di ROS e il conseguente stress ossidativo, come precedentemente dimostrato in cellule umane esposte a GO. 45,46 A causa delle loro proprietà chimiche, i ROS sono reattivi con diverse molecole biologiche, causando danni ossidativi di proteine, lipidi e DNA. 47 Tali effetti sono stati registrati anche in A. salinae altri organismi esposti a nanomateriali a base di carbonio, tra cui GO, attraverso la valutazione della produzione di ROS e l’attività di enzimi antiossidanti come biomarcatori dello stress ossidativo. 12,13,48 L’enzima antiossidante considerato in questo lavoro è il GST, un enzima multifunzionale coinvolto nella disintossicazione da xenobiotici e ROS, 49 anche nell’Artemia . 50,51 L’attività degli enzimi di disintossicazione può essere alterata in risposta agli xenobiotici, rendendoli idonei marker di stress da xenobiotici 52 e l’induzione di GST fa parte di un meccanismo di risposta adattativa allo stress chimico, ampiamente distribuito negli organismi viventi. 53Negli organismi acquatici, l’attività del GST può essere aumentata dall’esposizione a diversi xenobiotici, inclusi contaminanti ambientali come pesticidi e organofosfati. 54

Quindi, è stato valutato il possibile ruolo dello stress ossidativo nella mortalità degli adulti di A. franciscana indotta da GO. Nonostante il GO non abbia indotto alcun aumento significativo della produzione di ROS fino a 72 ore di esposizione, la sua concentrazione più alta (100 μg mL -1 ) ha causato un significativo aumento dell’attività GST dipendente dal tempo, rilevabile già dopo 24 ore di esposizione e diventando più pronunciato dopo 72 ore. h. Questo risultato e l’evidenza che la più alta attività GST è stata registrata nelle stesse condizioni di esposizione al GO che inducono mortalità di A. franciscana adulti (100 μg mL -1 a 72 h), suggeriscono un possibile ruolo di questo enzima nel tentativo di disintossicare il materiale e/o scavenging ROS. Tuttavia, dato che molti enzimi antiossidanti sono presenti inArtemia ( cioè catalasi, glutatione perossidasi, superossido dismutasi e altri), non si può escludere che anche altri sistemi antiossidanti intracellulari possano contribuire alla detossificazione dei ROS, oltre al GST. Nonostante l’aumentata attività GST indotta dal GO e l’evidenza che nessuna delle condizioni di esposizione (comprese quelle che inducono mortalità) abbia causato un aumento significativo dei ROS, possiamo ipotizzare che la morte per Artemia possa non essere associata allo stress ossidativo, escludendo quindi i ROS da i meccanismi di tossicità GO in questo organismo. I nostri risultati sono in accordo con un aumento dell’attività GST indotta da GO in altri organismi acquatici, come Crossostrea virginicadopo una lunga esposizione (14 giorni), che suggerisce una up-regulation degli enzimi di disintossicazione come risposta di difesa per contrastare lo stress ossidativo causato dalla GO. 55 Tuttavia, contrariamente alle nostre osservazioni, Zhu et al. hanno riportato un leggero ma significativo aumento della produzione di ROS e una ridotta attività GST nel primo stadio larvale di A. salina esposta a 100 μg mL -1 GO per 24 h. 13 Questa discrepanza potrebbe essere dovuta all’uso di differenti stadi di sviluppo o differenti Artemiaspecie e/o alle differenze fisico-chimiche tra i due GO. Sulla base della caratterizzazione fisico-chimica disponibile, il materiale utilizzato da Zhu era più piccolo e sottile (dimensione fino a 3 μm; numero di strati < 3) rispetto al GO utilizzato in questo studio (dimensione laterale media di circa 15 μm; numero di strati = 6). Tuttavia, non sono disponibili dati di analisi elementare, in particolare la quantità di atomi di O. Poiché la quantità di atomi di O è una caratteristica chiave che influenza la tossicità del GBM, non è possibile estrapolare ulteriori considerazioni sulla relazione struttura-attività.

Dopo l’esposizione a GO, è stata osservata anche una diminuzione della motilità negli adulti di A. franciscana , in particolare alla concentrazione più alta (100 μg mL -1 ). Per valutare se questo effetto fosse correlato a una possibile neurotossicità mediata da fattori biochimici che porta a una ridotta motilità dell’organismo, è stata valutata l’attività di ChE come enzima chiave coinvolto nell’idrolisi del neurotrasmettitore acetilcolina. La ChE, in particolare l’acetilcolinesterasi, svolge un ruolo chiave nella regolazione del sistema di segnalazione colinergico e nel mantenimento di una regolare funzione neuromuscolare. Questo enzima può essere inibito da xenobiotici neurotossici, portando ad un aumento del livello di acetilcolina nella sinapsi con conseguente compromissione della funzione neuromuscolare. 56Tuttavia, non sono state osservate differenze significative in questa attività enzimatica dopo l’esposizione di adulti di A. franciscana a GO. Questo risultato è in linea con uno studio precedente che mostrava che GO (100 μg mL -1 ) non ha modificato l’attività ChE nei naupli di Artemia dopo 48 ore di esposizione. 12 Queste osservazioni suggeriscono che la ridotta mobilità dell’Artemia non è correlata alla ridotta attività ChE come effetto biochimico mediato innescato dalla GO, ma piuttosto al blocco fisico degli organismi da parte della GO. Questa ipotesi è corroborata dalla presenza di aggregati/agglomerati di GO al di sopra del corpo dell’Artemia , che probabilmente ostacolano la motilità di questi organismi.

Ulteriori esperimenti per indagare gli effetti del GO sulla crescita di A. franciscana sono stati effettuati valutando il contenuto proteico negli organismi esposti al materiale. Infatti nel crostaceo Daphnia magna il contenuto proteico è considerato un buon indicatore dello stato nutrizionale e riflette le condizioni fisiologiche dell’organismo. Per questo motivo questo parametro viene utilizzato come indicatore delle condizioni di stress e può essere utilizzato per valutare gli effetti tossici dei contaminanti ambientali. 57 Il contenuto proteico totale in Artemiariflette le condizioni metaboliche dell’organismo, e di conseguenza l’esposizione a uno xenobiotico potrebbe influenzare il livello proteico in risposta allo stress e alla perdita di energia, come mostrato dopo l’esposizione a nano-sferule di polistirene. 58 Tuttavia, i nostri risultati mostrano che il contenuto proteico di A. franciscana non è stato significativamente influenzato dall’esposizione a qualsiasi concentrazione di GO per 24 e 72 ore, suggerendo alcun effetto significativo sul tasso di crescita di questo organismo.

Come fase finale, abbiamo studiato se gli effetti tossici della GO sugli adulti di A. franciscana potrebbero essere correlati all’ingestione di questo materiale e se il cibo potrebbe avere un ruolo nella modulazione dell’ingestione di GO. La capacità di Artemia sp. per ingerire diversi tipi di nanomateriali, come nanotubi di carbonio, 40 fiocchi di monostrato di grafene incontaminati, 22 punti quantici di ossido di grafene, 23 nero di carbonio 16 e GO ( rif. 13 ) è stato già descritto. Va comunque segnalato che, in ambienti naturali, A. franciscana non è esposta esclusivamente alla GO, ma più verosimilmente anche alla sua alimentazione fisiologica ( es.microplancton). Questo presupposto ci ha portato a ipotizzare che la bassa tossicità del GO osservata nel nostro studio potesse essere correlata, almeno in parte, alla sua ridotta assunzione e di conseguenza ad un ridotto livello di esposizione a questo materiale, dovuto alla presenza di cibo. Pertanto, la presenza di GO nel tratto digestivo degli adulti Artemia è stata verificata in presenza o assenza di cibo. I gamberetti sono stati in grado di ingerire GO, ma quando gli organismi sono stati nutriti con i loro nutrienti fisiologici, la presenza di GO nel lume del tubo digerente è diminuita rispetto al cibo. Pertanto, la presenza di cibo potrebbe ridurre l’esposizione dell’organismo al GO per ingestione con conseguente attenuazione del suo effetto tossico.

Conclusioni

Il presente studio ha mostrato un debole effetto tossico del GO su A. franciscana , un organismo modello acquatico utilizzato per studi ecotossicologici. Gli organismi allo stadio adulto erano più sensibili di quelli allo stadio I dei naupli. Nello specifico, il GO ha aumentato significativamente la mortalità degli adulti del 25% solo alla concentrazione più alta (100 μg mL -1 ) e 72 ore di esposizione. La stessa concentrazione di GO ha indotto un aumento tempo-dipendente dell’attività GST, suggerendo l’attivazione dell’enzima di disintossicazione. Tuttavia, altri parametri biochimici, come la produzione di ROS, l’attività ChE e il contenuto proteico, non sono stati influenzati negli adulti di Artemia esposti a GO fino a 72 h. Pertanto, GO ha un impatto negativo, sebbene debole, su A. franciscanaadulti, inferiore a quello di altri materiali a base di carbonio. Considerando che gli effetti tossici del GO si osservano solo a concentrazioni molto elevate e lunghi tempi di esposizione, possiamo ipotizzare un basso impatto ecotossicologico del nanomateriale su questo organismo bersaglio. Infatti, 100 μg mL -1 è una concentrazione di GO piuttosto elevata e la mancanza di dati affidabili sul livello di contaminazione da GBM nell’ambiente acquatico non consente di considerarlo un possibile livello di esposizione per gli organismi acquatici. In ogni caso, non si può escludere che un tale livello di esposizione al GO possa verificarsi accidentalmente, come nel caso di rilascio improvviso di enormi quantità di nanomateriale in un lasso di tempo limitato. Questa ipotesi suggerisce che anche se l’impatto ecotossicologico di GO su A. franciscanapuò essere basso in situazioni particolari, questo nanomateriale potrebbe influenzare questo organismo come parte della catena alimentare nel sistema acquatico. Non si può quindi escludere che una diminuzione, anche modesta, della popolazione di Artemia conseguente agli effetti della OB possa incidere negativamente sulla disponibilità di cibo per i predatori. Inoltre, l’eventuale accumulo del nanomateriale in Artemia potrebbe anche portare ad effetti tossici in altri organismi conseguentemente al bioaccumulo di GO lungo la catena alimentare. Tuttavia, sono necessari ulteriori studi su altri organismi acquatici per ampliare la conoscenza dell’impatto ecotossicologico del GO.

Conflitto di interessi

Gli autori dichiarano assenza di conflitto di interesse.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dalla convenzione di sovvenzione Graphene Flagship Core 2 e Core 3 (rispettivamente n. 785219 e 881603,). Parte di questo lavoro è stato svolto nell’ambito del programma di unità di eccellenza Maria de Maeztu dell’Agenzia di ricerca statale spagnola – Grant No. MDM-2017-0720. M. Prato è destinatario della Cattedra AXA di Carbon Bionanotechnology (2016-2023). Gli autori sono grati al gruppo di Genomica Applicata e Comparata del Prof. Alberto Pallavicini (Università di Trieste, Dipartimento di Scienze della Vita) per il prezioso aiuto nell’analisi genetica.

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Nota

  1. † Disponibilità di informazioni supplementari elettroniche (ESI). Vedi DOI: 10.1039/d0en00747a

Questa rivista è © The Royal Society of Chemistry 2020

Graphene Jab: connettere gli esseri umani all’Internet delle cose e all’intelligenza artificiale

di Lee Austin

Uno degli scopi del jab al grafene è connettere gli esseri umani all’Internet Of Things e all’intelligenza artificiale.

Il grafene si trova nella grafite. I cristalli formati dal grafene hanno la capacità di produrre un film continuo, capace di conduttività. Elemento trasparente del carbonio, il grafene ha un legame strutturale più forte di un diamante e tuttavia cento volte più flessibile del silicio. Il grafene è una sostanza impermeabile fatta di plasmoni, che migliorano le interazioni luce-materia più degli elettroni tipici.

L’applicazione e i vantaggi del grafene sono sbalorditivi. Ad esempio, le finestre in grafene potrebbero funzionare anche come pannelli solari, fornendo il fabbisogno energetico di ogni edificio del mondo. Veicoli, navi e aerei in grafene trasformati in magazzini autogeneranti di elettromagnetismo illimitato. Rivestindo ogni oggetto fisico con una pellicola di grafene, i transumanisti immaginano l’avvento dell’Internet Of Things.

Trilioni di nanobot di polvere intelligente in grado di rilevare luce, temperatura, magnetismo, sostanze chimiche e vibrazioni. Operare su una rete di computer Wi-Fi wireless e trasmettere la sua identificazione univoca a radiofrequenza.  

Wuhan è stato il beta test per l’attivazione di nanobot metallici di polvere intelligente tramite la rete 5G? Ed è solo una coincidenza che l’onda 5G sia nota come onda “V”, come nel virus? A 60 giga hertz, il 5G può influenzare l’emoglobina, che trasporta l’ossigeno dai polmoni ai tessuti del corpo.  

I nanobot di polvere intelligente contenuti nel vaccino mRNA potrebbero essere attivati ​​dalle onde 5G, stimolando i nanobot dormienti nei corpi dei colpiti. Consentendogli di digitalizzare internamente tramite i nanobot autoreplicanti. Gli esseri umani si sono trasformati in portatori di magnetismo. La necessità di portare un passaporto del vaccino nello smartphone è stata eliminata, poiché il corpo ora ibrido di metallo e argilla diventa un trasmettitore della convalida del passaporto del vaccino.

Attualmente, il clamore riguarda l’individuazione di chi ha ricevuto e non ha ricevuto il vaccino. Un sistema basato sul sistema dell’onore, che la maggior parte ignorerà. Essenzialmente il jabbed e un jabbed ora si mescolano, con grande dispiacere delle pecore compiacenti. Uno scenario caotico intenzionale è stato imposto al mondo. O più precisamente, problema, reazione, soluzione. Il problema è come sapere chi ha preso il colpo e chi no? La reazione delle pecore è la rabbia e la richiesta di una risoluzione. La soluzione è la risonanza magnetica o più comunemente noto come scanner MRI.

Il corpo umano è composto principalmente da acqua contenente atomi di idrogeno e ossigeno. Al centro di ogni atomo c’è un protone, che funziona come un magnete ed è sensibile a qualsiasi campo magnetico. A riposo, le molecole d’acqua sono disposte casualmente, ma quando esposte a uno scanner MRI, il primo magnete fa sì che le molecole d’acqua si allineino in una direzione e il secondo magnete spinge le altre molecole a stabilirsi in un’altra. Ora mescola nanobot di polvere intelligente e uno scanner MRI potrebbe rilevare qualsiasi campo magnetico innaturale emanato dal corpo. Analogamente alla funzionalità dei metal detector aeroportuali, gli scanner MRI mobili potrebbero essere installati in ogni punto di ingresso di ogni azienda, scuola e ospedale del paese. 

Contenuti all’interno dell’idrogel di ossido di grafene, i nanobot di polvere intelligente sono attivati ​​magneticamente dal segnale 5G e spingono l’idrogel contenente l’RNA. Questo meccanismo fornisce la propulsione necessaria per penetrare nella membrana cellulare e muoversi attraverso il liquido citoplasmatico contenuto all’interno della cellula. L’RNA perforerà quindi il nucleo e inizierà a replicarsi naturalmente in un filamento attorcigliato di DNA a doppia elica. Ma un DNA che è rivestito artificialmente. Una creazione di RNA e riarrangiamento dei nucleotidi. Produzione di una sequenza artificiale di DNA. Sebbene la sequenza sia artificiale, la codifica è permanente. Il sistema immunitario naturale del corpo passerà quindi tutto il tempo a combattere la proteina spike sintetica, che continua a replicarsi senza sosta.  

Il gioco finale per l’élite luciferiana è controllare la classe restante della gleba da un computer bestiale quantistico centralizzato. Ricerche web, contatti, social media, pensieri ed emozioni verranno caricati in una mente collettiva alveare. I modelli algoritmici segmentati prediranno con precisione il comportamento futuro. Sarà un Nuovo Ordine Mondiale singolare, collettivo, universale, spiritualmente inserito nella matrice di Lucifero. Conoscenza condivisa senza pensieri o opinioni individuali. Conformità acritica che crea una singolarità tecnologica dell’intelligenza collettiva. Una tribolazione tecnocratica di sette anni.

Lee Austin è l’autore di “Morning Star’s Tale”

Struttura molecolare del grafene: stella di David Hexagon e la massoneria

Riporto un interessante articolo di esoterismo scritto da Lee Austin e fresco fresco di pubblicazione:

di Lee Austin

La struttura molecolare del grafene ha la forma dell’esagono della Stella di David, simbolo di Israele, noto anche come Sigillo di Salomone, l’anello con sigillo associato al re Salomone, al misticismo e all’occultismo ebraico/islamico.

Come disse una volta Confucio, “Segni e simboli governano il mondo, non parole né leggi”.

Ritenuto il composto principale contenuto nell’iniezione di covid, le nanoparticelle di ossido di grafene hanno bordi taglienti in grado di tagliare i vasi sanguigni a livello microscopico ed è il materiale più leggero sulla terra, misurando un atomo. Il composto più forte mai scoperto, miglior conduttore di calore ed elettricità a temperatura ambiente. Il grafene contiene una capacità di larghezza di banda ultra ampia, che gli conferisce la capacità di connettere gli esseri umani a una griglia elettromagnetica e all’Internet Of Things.

L’esagono non è contenuto solo all’interno della Stella di David/Sigillo di Salomone, ma anche in cima a Saturno, noto come Black Star, il pianeta di Satana, che si manifesta simultaneamente come una stella a sei punte e un esagono, la forma del grafene. Nell’occulto, il simbolo di due triangoli convergenti è immerso nel Bonpo, la setta buddista della Magia Nera. Saturno, il pianeta viola, rappresenta Kali, la dea indù della morte e del tempo. Rosso e Blu sono i colori primari alchemici della Massoneria. Il viola è il colore della regalità, indossato da Gesù il giorno della sua crocifissione.

I triangoli equilateri nella Stella di David/Sigillo di Salomone rappresentano la dualità presente in tutte le religioni orientali. Simile allo Ying e allo Yang, l’esagono del Sigillo di Salomone unisce tutte le cose buone e cattive in uno. Durante il regno di Salomone, i cabalisti lo proponevano come condotto della magia occulta e dell’invocazione degli spiriti.

Durante la seconda guerra mondiale, i nazisti arruolarono gli ebrei per indossare l’esagono del sigillo di Salomone come una maledizione simbolica, deridendo il popolo eletto di Dio. Per i cabalisti, il Sigillo di Salomone è il numero della Bestia. Sei triangoli, sei punti, sei linee. Sei sei sei. Nonostante la sua connessione spirituale con la morte, Israele lo adottò come simbolo nazionale. 

La Kabbalah è la religione satanica dei misteri del mondo postmoderno. Radicata nella Massoneria, la dottrina fondamentale della Kabbalah è l’apoteosi o resurrezione dell’uomo, che riflette l’immagine di Lucifero. Attraverso la pratica della Magia Nera e gli insegnamenti esoterici del misticismo occulto. La Kabbalah rivela il Dio della Bibbia come il Demiurgo, il Dio minore e creatore dell’universo materiale. Tuttavia, inferiore a Lucifero Morning Star, The Light Bearer.

All’interno della religione dei misteri, i simboli illustrano la dualità del caos e della restaurazione simultaneamente. I punti simboleggiano il caos. Le strisce rappresentano l’imminente Quinta Era dell’Acquario. I cabalisti sposano Dio come incomprensibile. Pertanto, sono gli Dei. Divinizzare se stessi elimina tutte le connessioni con l’Antico dei Giorni. 

Il Libro di Daniele profetizzò cinque epoche separate, che rappresentano oro, argento, bronzo, ferro/argilla e pietra. Viviamo nella quarta era del ferro/argilla e i Luciferiani credono che presto avranno accesso alla pietra filosofale e alla sua leggendaria sostanza alchemica Black Goo. Mescolando il ferro della tecnologia, con l’argilla di un’immagine, creando un eterno Trans-umano. Il grafene potrebbe essere il composto per inizializzare il processo di trasformazione dell’uomo in un ibrido di ferro e argilla?

Tutto il dominio che Lucifero stabilisce nel primo e secondo cielo è un’imitazione della creazione di Dio. Come sopra, così sotto illustra la menzogna della dualità e della confusione. Massoni e Cavalieri dei Templari credono che il Demiurgo e Lucifero siano entrambi Dei, come dimostrato nel pavimento a cavalletti bianco e nero delle Sale Massoniche e Ying e Yang della filosofia cinese. 

La menzogna sistemica della Kabbalah postula che Dio sia la totalità di tutto: bene e male, conoscibile, inconoscibile, illimitato, limitato, misericordioso e crudele. All’inizio, i cabalisti credono che Dio abbia inviato un’emanazione di se stesso sotto forma di dieci luci chiamate Sephiroth o Albero della Conoscenza Segreta. Ciò equivale al nome I Am. L’universo è composto da sfere stratificate di frequenze, con l’Antico dei Giorni che governa dalla nona dimensione/cielo. 

Per essere uno con il Portatore di Luce, i discepoli devono passare attraverso le nove sfere custodite, che sono protette da angeli e diavoli. Solo chi conosce le password del guardiano può passare attraverso le nove sfere. La conoscenza gnostica illumina l’anima mentre sale la scala dei Sephiroth, raggiungendo l’apoteosi. Le dieci sfere Sephiroth sono le forze trainanti che muovono tutta la creazione. 

Secondo Il Libro dei Segreti di Enoch, ci sono dieci cieli nel multiverso.

Il capitolo 22, versetti 1-2 dice: “Nel decimo cielo, l’arcangelo Michele condusse Enoc davanti al volto del Signore. Al decimo cielo, Aravoth (il cielo più alto di tutti i dieci cieli), ho visto l’apparizione del volto del Signore, come ferro fatto scorrere nel fuoco, e portato fuori, emettendo scintille, e brucia. Così, ho visto il volto del Signore, ma il volto del Signore è ineffabile, meraviglioso e molto terribile, e molto, molto terribile”. 

I cabalisti dividono l’universo in quattro mondi, ciascuno composto da dieci sfere, incastonate e disposte nell’Albero Sephirotico o Albero della Conoscenza Segreta. La filosofia segreta è nascosta all’interno della struttura sistemica dell’Albero Sephirotico, rivelando i misteri dell’Antico e del Nuovo Testamento. 

Il Libro di Enoch, capitolo 24, versetti 9-11 dice: “E quell’albero di un odore gradevole, non di odore carnale, non ci sarà il potere di toccarlo, fino al periodo del grande giudizio, quando tutti saranno puniti e consumato per sempre. questo sarà concesso ai giusti e agli umili. Il frutto di questo albero sarà dato agli eletti. Poiché verso il settentrione la vita sarà piantata nel luogo santo, verso la dimora del re eterno. E ho benedetto il Signore della gloria, il Re eterno, perché ha preparato questo albero per i santi, l’ha formato e ha dichiarato che lo avrebbe dato loro”. 

Con le braccia e le gambe estese, l’uomo è l’incarnazione del Superuomo/Transumano dell’Albero Sephirotico. Composto da dieci globi, l’Albero della Conoscenza Segreta ha tre colonne verticali collegate da ventidue canali. Questo rappresenta l’Adamo perfetto. Nel suo corpo transumano originale, Adam ha mostrato il suo spirito all’esterno del suo corpo. Spiritualmente, l’Albero Sephirotico simboleggia Adamo che riflette la luce di Lucifero. 

Tre gradini all’interno della porta d’ingresso di ogni loggia massonica sono due pilastri che rappresentano la dualità. Ogni colonna è adornata con melograni e una sfera. Un pilastro è sormontato da una terra rotonda e l’altro da un progetto dell’universo. La colonna di destra, Jachin, è la misteriosa colonna della misericordia. La colonna di sinistra, Boaz, è il pilastro della severità. Queste colonne ebraiche sono il punto di accesso al luogo della trasformazione mistica, come rappresentato dal dio egizio Amon-Ra. La terza colonna centrale rappresenta l’Equilibrio, definito come saggezza, forza e bellezza.  

La loggia massonica è eminentemente diversa dal tempio ebraico di Salomone. Tra le colonne di Jachin e Boaz c’è un altare che mostra il Compasso, la Squadra e la Bibbia. Questi sono conosciuti come le Grandi Luci della Massoneria. Adiacenti a queste luci sono i tre candelabri, o tre luci minori. Insieme formano un triangolo, simbolo del Sole, della Luna e del Maestro Hiram Abiff, il primo maestro massone immortale e progettista originale del tempio di Salomone. 

Il pavimento che circonda l’altare è ricoperto di piastrelle bianche e nere, disposte a scacchiera, a simboleggiare la dualità della vita. Una stella fiammeggiante si trova ben in vista sopra l’altare. Il triangolo contenente il quadrato, il compasso e la lettera G al centro. Il soffitto del tempio massonico è adornato di blu, segni dello zodiaco e una catena di corda, che illustra l’unità dei massoni su tutta la terra. Dalla stanza principale una porta conduce in una stanza di meditazione annerita. Esposizione di disegni di scheletri, teschi, sale, pane nero, carta da lettere, un bicchiere d’acqua e un tavolo nero. Nell’ultima stanza interna c’è uno scheletro dentro una bara. 

Il tempio massonico è un affronto e una presa in giro del tempio di Salomone. I membri della Loggia massonica sono rappresentazioni terrene dei luminari ribelli. Il Venerabile Maestro rappresenta il Sole. L’oratore rappresenta Mercurio. Il segretario rappresenta Venere. Il tesoriere rappresenta Marte. I guardiani rappresentano Urano/Nettuno. Il Primo Esperto rappresenta Saturno. Il Maestro delle Cerimonie rappresenta la Luna. Cammina in maniera ellittica raffigurando l’orbita della Luna all’interno della loggia. 

La Loggia Massonica è stata costruita come tributo a Osiride. La Trinità egizia di Osiride, Iside e Horus costituisce il fondamento spirituale sia della Grande Piramide di Khufu che del Tempio Massonico. 28 La verità si trova nei numeri. Nel dialetto ebraico Geova si scrive collegando ventiquattro punti. Ventiquattro anziani sono costantemente davanti al trono del Demiurgo. La potenza del male è il segno di Geova capovolto. E la vera parola di un massone si trova nel nome della divinità. Verità in segreto. Anche i druidi sapevano che c’era un potere spirituale nei numeri, poiché il venticinque dicembre è celebrato come la nascita del dio del sole Ra. 

L’occultista e mago cerimoniale francese del diciannovesimo secolo Eliphas Levi postulò che l’uomo potesse scoprire tutto ciò che è conoscibile e nascosto riguardo all’Antico dei Giorni comprendendo la dinamica tra i dieci globi dell’Albero Sephiroth e le ventidue lettere della lingua ebraica. I ventidue canali sono un’illustrazione della carta vincente più importante nel mazzo di carte dei Tarocchi. Dieci globi e ventidue lettere equivalgono al numero occulto trentadue. I Luciferiani credono che ci siano trentadue percorsi di saggezza. Questo è il sistema segreto per organizzare i misteri della creazione che sono nascosti nel trentaduesimo grado della Massoneria. Trentadue denti in bocca, nervi che collegano il cervello. E trentadue segmenti spinali al cranio. Trentadue è il numero di volte in cui il nome Io Sono ricorre nel libro della Genesi. Segui i numeri. Precedentemente noto come la confraternita della morte, Skull and Bones 3:22 derivano il loro numero dal Libro della Genesi. 

Genesi 3:22 dice: “Allora il Signore Dio disse: ‘Ecco, l’uomo è diventato come uno di noi, per conoscere il bene e il male. Ed ora, affinché non stenda la mano e prenda anche dell’albero della vita, ne mangi e viva in eterno’”. 

Il trentaduesimo grado della Massoneria eleva il candidato alla dignità di Principe del Reale Segreto. Un mimetismo del Principe della Pace. Un grado sotto il Portatore di Luce. il trentatreesimo grado della Massoneria è la rivelazione finale di Lucifero come Il Grande Architetto dell’Universo.

Lee Austin è l’autore di “Morning Star’s Tale” 

https://morningstarstale.com/

I Maneskin pro vax, la massoneria e la strategia degli influencer

Personalmente credo che in tutta la loro discografia ci sia un solo brano prodotto interessante. Anche sforzandomi di ascoltare non ho trovato alcun brano che meritasse il mio cuoricino per essere inserito nella mia personale playlist su spotify. Succede che all’improvviso, con un brano che del rock ha veramente poco in comune se non la mancanza di dinamiche, la band dei Maneskin si ritrova a vincere un contest europeo: Eurovision Song Contest 2021.

Vendere l’anima al diavolo, anche i Maneskin?

Nel mondo della musica non è raro incontrare questa espressione. Sembra che il successo degli artisti sia legato ad uno scambio importante che avviene con il proprio profondo essere e una entità demoniaca soprannaturale. Mai come oggi questa situazione trova riscontro nella realtà; la prima azione del dopo vittoria è stata quella di abbandonare o rescindere i contratti con la manager storica della band, Marta Donà che li ha seguiti fin dai primissimi passi. La stessa che segue anche artisti del calibro di Marco Mengoni, Francesca Michielin, Alessandro Cattelan. L’annuncio è arrivato dalla diretta interessata, @latarma su Twitter: “Abbiamo trascorso 4 anni indimenticabili pieni di sogni da esaudire e di progetti realizzati. Io vi ho portato fino a qui. Da adesso in poi avete deciso di proseguire senza di me. Ho il cuore spezzato ma vi auguro il meglio dalla vita ragazzi”, le sue parole, che trasudano dispiacere.

Ovvero: ora chi vi seguirà sarà direttamente la massoneria che ha grandi progetti per il vostro futuro di band music… ehm scusate, di INFLUENCER.

La posizione pro vax dei Maneskin

Quale migliore occasione per iniziare il loro nuovo lavoro se non quello di esporsi positivamente all’assunzione del presunto vaccino? Capita a fagiuolo si suol dire; oppure tutta la messa in scena era una messa in scena pianificata. E questo è il lato più oscuro della questione, il lato invisibile al più delle persone, il filo demoniaco che lega gli eventi nel loro apparente scorrere temporale.

Perchè vendere l’anima al diavolo?

Il presunto vaccino è intriso di nano particelle di grafene, il materiale del futuro, comodissimo in tantissime applicazioni eccetto quella di farselo inoculare. Le nano particelle di grafene sono nanobot attivi a tutti gli effetti, hanno proprietà magnetiche, termiche, elettriche. Possono generare proteine se stimolate da adeguati campi magnetici. Possono interagire con il nostro DNA, possono forzare il corpo a produrre ormoni, dopamina ecc…

Forse la massoneria ha trovato il modo di creare un terzo filamento di DNA attorno ai due già presenti nel nostro corpo sfruttando le catene ribonucleiche. In questo modo non saremmo più creati a immagine e somiglianza del creatore… sembra surreale ma è plausibile, anche alla luce delle attività di costruzione di città sotterranee da parte delle elites mondiali, come se volessero scappare da qualcosa.

Ora che i Maneskin sono completamente pilotati dalla massoneria al pari di Fedez, Paolo Bonolis e compagnia bella del mainstream le nuove generazioni non possono fare altro che seguire i loro idoli facendosi inoculare e diventare schiavi biologici dei potenti della terra, gli stessi che sventolano la bandiera dell’ecosostenibilità (con alle loro spalle azioni acquistate nel mondo dei petroli) e della salute del popolo (dopo aver ridotto il numero degli ospedali e introdotto politiche di privatizzazione della sanità).

Solo per dire: sappiatelo!

La tecnologia di “neuromodulazione” basata sul grafene è REALE: il comunicato stampa di INBRAIN Neuroelectronics descrive i biocircuiti che controllano il cervello utilizzando il grafene alimentato dall’intelligenza artificiale

Immagine: la tecnologia di “neuromodulazione” basata sul grafene è REALE: il comunicato stampa di INBRAIN Neuroelectronics descrive i biocircuiti che controllano il cervello utilizzando il grafene alimentato dall’intelligenza artificiale
( Natural News ) Con un numero crescente di persone che vengono a conoscenza dell’identificazione dell’ossido di grafene nei vaccini contro il covid, una società chiamata INBRAIN Neuroelectronics dimostra che la tecnologia di “neuromodulazione” basata sul grafene che utilizza la neuroelettronica basata sull’intelligenza artificiale è molto reale.

Un comunicato stampa del 30 marzo 2021 pubblicato da BusinessWire.com rivela la storia:

INBRAIN Neuroelectronics ottiene 17 milioni di dollari in un finanziamento di serie A per la prima interfaccia grafene-cervello basata sull’intelligenza artificiale
Il finanziamento consente all’azienda di portare avanti gli studi primi sugli esseri umani per il suo prodotto di punta, un dispositivo di neuromodulazione meno invasivo per il trattamento di condizioni neurologiche utilizzando l’intelligenza artificiale e gli elettrodi di grafene

Per essere chiari, non stiamo in alcun modo affermando che INBRAIN sia coinvolto nei vaccini covid. Piuttosto, affermano che la loro tecnologia viene utilizzata “per curare l’epilessia e il morbo di Parkinson”. Lo scopo di coprire INBRAIN è rivelare che i “biocircuiti” di controllo del cervello basati sul grafene sono, in effetti, una tecnologia molto reale.

I cosiddetti “controllori dei fatti” – che non sono altro che spacciatori di propaganda di disinformazione – affermano abitualmente che il grafene non si trova nei vaccini e che i biocircuiti del grafene sono una teoria della cospirazione. INBRAIN Neuroelectronics dimostra che i fact check mentono.

Infatti, come afferma INBRAIN nel proprio comunicato stampa, “mirano a stabilire la sicurezza del grafene come il nuovo standard di cura per i dispositivi neurotecnologici”.

Descrivono anche i biocircuiti di grafene come una sorta di piattaforma che può essere aggiornata:

Tecnologie neuroelettroniche meno invasive e più intelligenti come la nostra potrebbero fornire terapie più sicure, aggiornabili e adattive in tempo reale…

Se questo suona familiare, è probabilmente perché Moderna, creatore del vaccino covid mRNA, ha descritto la sua tecnologia come un “sistema operativo” che può essere aggiornato e riprogrammato in qualsiasi momento.

Sul sito web di INBRAIN Neuroelectronics , l’azienda si descrive così:

Siamo scienziati, medici, tecnici e amanti dell’umanità, con la missione di costruire interfacce neuroelettroniche per curare i disturbi cerebrali. Usiamo GRAPHENE, il materiale più sottile conosciuto dall’uomo per costruire la nuova generazione di interfacce neurali per il ripristino del cervello per aiutare i pazienti di tutto il mondo.

Inoltre tranquillizza il Prof. A. Fasano, dicendo: “Il grafene è la prossima grande novità nei materiali di bioingegneria, che sono componenti fondamentali per la prossima generazione di elettroterapie nel campo in costante crescita della neuromodulazione”.

L’azienda evidenzia che la sua tecnologia è in grado di “leggere” il cervello di una persona, rilevare modelli neurologici specifici e quindi controllare la neurologia di quella persona per alterare la sua funzione cerebrale. Nelle loro stesse parole:

Le nostre interfacce grafene-cervello hanno la capacità di leggere con una risoluzione mai vista prima, oltre a rilevare biomarcatori specifici della terapia e attivare una neuromodulazione adattiva altamente focale per risultati migliori nelle terapie neurologiche personalizzate.

Il grafene è ulteriormente descritto come “il materiale più sottile conosciuto per adattare perfettamente la stimolazione all’anatomia cerebrale mirata”.

Chiunque dica che il grafene non viene utilizzato per controllare la neurologia umana o ignora completamente lo stato della neuroscienza moderna o mente deliberatamente.

Per chiarire ancora una volta, non stiamo affermando che INBRAIN Neuroelectronics sia impegnata in alcun tipo di programma nefasto, né che sia coinvolta nei vaccini covid. Come per ogni tecnologia, i biocircuiti a base di grafene possono essere utilizzati sia nel bene che nel male, a seconda dell’etica e delle motivazioni di chi controlla la tecnologia . Ci sono senza dubbio applicazioni molto positive per questa tecnologia, ma come con la maggior parte delle tecnologie che una volta erano propagandate come responsabili dell’umanità – televisione, vaccini, Internet, energia nucleare, robotica, ecc. – finiscono tutte nelle mani di pazzi, genocidi globalisti che li brandiscono come armi contro l’umanità.

In altre parole, non c’è tecnologia che i pazzi non sfruttino per schiavizzare l’umanità e aumentare il proprio potere e controllo. I biocircuiti al grafene danno ai pazzi assetati di potere un accesso diretto al cervello e, secondo molti analisti (vedi sotto), i vaccini forniscono la scusa per iniettare alle vittime umane sostanze a base di grafene che si autoassemblano in biocircuiti nel cervello umano.

DICHIARAZIONE: I vaccini Covid contengono alti livelli di ossido di grafene, che viene autoassemblato in biocircuiti raccogliendo elementi (come il ferro) dal sangue umano
Come riportato da Orwell.city , un gruppo chiamato La Quinta Columna ha analizzato i vaccini covid e ha scoperto che dal 98% al 99% della massa non liquida nel vaccino sembra essere ossido di grafene. Ricardo Delgado, parlando per La Quinta Columna, afferma:

Un fenomeno a lungo negato, ma che oggi è già stato dimostrato. Ci sono milioni di video di persone che vanno in giro per il mondo. Video su questo fenomeno di, chiamiamolo ‘pseudomagnetismo acquisito dopo l’inoculazione’, ma può essere acquisito anche attraverso altri modi. Quindi, una volta condotto quello studio epidemiologico di base, abbiamo iniziato a chiederci quali materiali o nanomateriali possono causare il magnetismo nel corpo. E non solo il magnetismo, ma quello potrebbe fungere da condensatori di energia, perché ho anche misurato in un multimetro una carica importante…

Si tratta di un fenomeno di induzione elettromagnetica nel metallo che aderisce in prossimità della zona di inoculazione. Inoltre, abbiamo scoperto che il magnetismo si sposta poi verso la testa. E questo è molto importante. Sicuramente per lo scopo che possono cercare. Inoltre, una differenza di potenziale viene misurata con un multimetro: la persona diventa un superconduttore. Cioè, emette e riceve segnali. E quando abbiamo trovato i materiali che possono causare questo tipo di alterazioni nel corpo, abbiamo iniziato a parlare di grafene. Sospettavamo che fosse ossido di grafene poiché aveva tutte le caratteristiche che le persone magnetizzate esprimevano dopo l’inoculazione.

Il grafene è tossico, è una sostanza chimica, un agente chimico tossico. Introdotto nell’organismo in grandi quantità, provoca trombi. Provoca coaguli di sangue. Abbiamo tutti gli articoli scientifici per sostenerlo. Provoca sindrome post infiammatoria, provoca alterazione del sistema immunitario. E quando l’equilibrio redox è rotto, nel senso che c’è meno glutatione di riserva del corpo rispetto a un tossico introdotto come l’ossido di grafene, si genera un collasso del sistema immunitario e una tempesta di citochine. In altre parole, qualcosa di molto simile alla malattia di moda, no?

Guarda il video qui:

Brighteon.com/eaff4c87-eb1d-4abd-9f6e-6edeebe6fe59

Delgado prosegue affermando:

E dato che tutte le persone a cui viene inoculato il vaccino Pfizer, che è stato quello che abbiamo inviato per l’analisi, così come Moderna, AstraZeneca, Johnson&Johnson, Janssen, Sinovac e tutti i tipi di vaccini acquisiscono proprietà magnetiche, sospettiamo con molte indicazioni che contengono tutti più o meno dosi di grafene, di ossido di grafene.

…sappiamo che proprio la N-acetilcisteina o il glutatione stesso degradano l’ossido di grafene. Questo è il motivo per cui pensiamo di aver colpito direttamente l’agente causale o eziologico della malattia.

Nel podcast di aggiornamento della situazione di oggi, tratterò maggiori dettagli su questa esotica nanotecnologia, comprese le nanostrutture di biocircuiti di grafene “autoassemblanti”, e come queste potrebbero costruire un’antenna per ricevere comandi o istruzioni da campi elettromagnetici esterni.

Se questo è ciò che sta accadendo, significa che i governi globali potrebbero essere in grado di controllare le masse vaccinate trasmettendo segnali dalle torri cellulari 5G. Sebbene sembri fantascienza, questa tecnologia è già stata dimostrata in esperimenti sui topi, coinvolgendo sia le SPION (nanoparticelle di ossido di ferro super paramagnetiche) per la somministrazione mirata di farmaci nei tessuti , sia le proteine ​​”magneto” che ottengono la neuromodulazione (controllo cerebrale).

Nel podcast di oggi, discuto anche dei tunnel sotterranei e delle città / basi sotterranee di Elon Musk, nonché del motivo per cui penso che i globalisti siano a conoscenza di un evento a livello di estinzione che minaccia la stessa sopravvivenza della civiltà umana. Tutti i dettagli qui:

Brighteon.com/378b3154-6cb8-4a59-97f1-ffbfe25d863e

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https://www.brighteon.com/channels/hrreport